產(chǎn)品名稱：康為世紀(jì) CW2105S 無內(nèi)毒素質(zhì)粒中提試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：CW2105S

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產(chǎn)品介紹：

　內(nèi)毒素是質(zhì)粒提取中常見的污染物，由于真核細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素非常敏感，因此，如果質(zhì)粒中含有內(nèi)毒素會(huì)大大降低真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。本試劑盒提供一種簡單、快捷、高效提取無內(nèi)毒素質(zhì)粒的新方法，提取的質(zhì)粒最大限度去除內(nèi)毒素，并能有效去除基因組DNA、RNA、蛋白等污染。

　　本試劑盒適合提取5-15ml菌液，在堿裂解法裂解細(xì)胞的基礎(chǔ)上通過新型硅基質(zhì)膜高效專一的結(jié)合質(zhì)粒DNA，每個(gè)吸附柱最高可吸附100 μg的質(zhì)粒DNA，同時(shí)采用特殊的緩沖液系統(tǒng)和除內(nèi)毒素過濾柱，有效去除內(nèi)毒素、蛋白等雜質(zhì)。由本試劑盒所得質(zhì)粒純度高、質(zhì)量穩(wěn)定，特別適用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染，同時(shí)也可用于DNA測序，PCR，基于PCR的突變，體外轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)化細(xì)菌，內(nèi)切酶消化等下游實(shí)驗(yàn)。

額外試劑要求：

無水乙醇，異丙醇。

產(chǎn)品組分：

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

1．所有組分可在干燥、室溫（15-30℃）環(huán)境穩(wěn)定保存1年，更長時(shí)間保存可置于2-8℃，加入RNase A的Buffer P1 置于2-8℃可穩(wěn)定保存6個(gè)月。

2．第一次使用前，將RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混勻，置于2–8℃保存，使用前需在室溫中放置一段時(shí)間，恢復(fù)至室溫后使用。

3．第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇。

4．使用前請(qǐng)先檢查Buffer P2 和Buffer E3是否出現(xiàn)結(jié)晶或沉淀，如有結(jié)晶或沉淀現(xiàn)象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。

5．注意不要直接接觸Buffer P2和Buffer E3，使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子。

6．提取質(zhì)粒的量和純度與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、菌株種類、質(zhì)粒大小、質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān)。

使用說明：

1．取5-15 ml過夜培養(yǎng)的菌液，加入離心管（自備）中，13,000 rpm（~16,200×g）離心1分鐘收集細(xì)菌，盡量吸棄全部上清。

2．向留有菌體沉淀的離心管中加入500 μl Buffer P1（請(qǐng)先檢查是否已加入RNase A），使用移液器或渦旋振蕩器充分混勻，懸浮細(xì)菌沉淀。

3．向離心管中加入500 μl Buffer P2，溫和地上下顛倒混勻8-10次，使菌體充分裂解，室溫放置3-5分鐘。此時(shí)溶液應(yīng)變得清亮粘稠。

4．向離心管中加入500 μl Buffer E3，立即上下顛倒混勻8-10次，此時(shí)出現(xiàn)白色絮狀沉淀，室溫放置5分鐘。13,000 rpm離心5分鐘，吸取上清，將上清加入過濾柱（Endo-RemoverFM）中（已裝入收集管），13,000 rpm離心1分鐘過濾，將收集管中的濾液轉(zhuǎn)移到離心管（自備）中。

5．向?yàn)V液中加入450 μl異丙醇，上下顛倒混勻。

6．柱平衡：向已裝入收集管的吸附柱（Spin Columns DL）中加入200 μl Buffer PS，13,000 rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

7．將步驟5中濾液與異丙醇的混合溶液轉(zhuǎn)移到平衡好的吸附柱（已裝入收集管）中。

8．13,000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

9．向吸附柱中加入750 μl Buffer PW（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），13,000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。

10.將吸附柱重新放回收集管中，13,000 rpm離心1分鐘。

11.將吸附柱置于一個(gè)新的離心管（自備）中，向吸附膜的中間部位加入100-200 μl Endo-Free Buffer EB，室溫放置2-5分鐘，13,000rpm離心2分鐘。-20℃保存質(zhì)粒。

保存條件：室溫（15-30℃）

產(chǎn)品名稱：康為世紀(jì) CW2105S 無內(nèi)毒素質(zhì)粒中提試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：CW2105S

產(chǎn)品訂購信息：

品牌             貨號(hào)             名稱                                     規(guī)格

康為世紀(jì)  CW2105S  EndoFree Plasmid Midi Kit     50 preps